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本制品是将PCR反应所需的Fast Pfu酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液以及优化剂以及稳定剂，预先配制成2倍浓度的混合物。2×Fast Pfu Master Mix专为扩增克隆DNA片段优化，高保真，错误率仅为1.3×10^-6。使用时只需在加入模板和引物并稀释到1倍浓度即可进行PCR反应，非常方便。较普通Pfu酶，2×Fast Pfu Master Mix具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点，能获得更理想的扩增结果，并大幅度缩短扩增反应时间，非常适用于1～20kb长片段的扩增。上样染料的加入不影响PCR反应，且在PCR反应完成后可直接电泳，节省时间。

用于要求保真度比较高，扩增长度较长的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等。

• 高保真：具有同Pfu酶相同的保真度，为普通Taq酶的50倍。
  
• 灵敏：可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出特定基因片段。
  
• 快速高效：Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍，72℃保温30秒可延伸1kb以上，可在较短时间内获得高产量的PCR产物。
  
• 快捷：PCR反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制。

组分	规格
2×Fast Pfu MasterMix(含染料)	1mL
说明书	1份

保存：-20℃


经检测无外源核酸酶残留；qPCR方法检测无大肠杆菌DNA残留；能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。


Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3'端"A"突出，除使用一步定向克隆试剂盒外，其它PCR产物的克隆方案有：

• PCR前引物进行5'端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。
  
• 将产物3'末端加A后再与T载体连接。
  
• 由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3'端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30mers。另外为了减少由3'→5'外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系。

• 需溶解完全后使用，防止离子浓度不均匀。
  
• 对高GC含量模板，建议将变性温度提高到98℃。
  
• 对于高GC模板，建议配套使用PCR增强剂III或者添加终浓度为5%～8% DMSO。

• 常用反应体系
  

  成分	用量
  2×Fast Pfu MasterMix(含染料)	25μL
  上游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
  下游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
  模板（请根据实际使用模版 进行选择，二选一即可）	1～50ng（质粒） 10ng～1μg（基因组）
  ddH2O	至50μL

  注：Mg²⁺终浓度为2mM。
  
• 推荐PCR反应程序
  
  • 当扩增片段＜3K：
    

    循环数	温度	时间
    1	94℃	90s
    30	94℃	20s
    	50～60℃	20s
    	72℃	1kb/30s
    1	72℃	5min
    1	4℃	保温

  • 当扩增片段≥3K(推荐引物长度≥30bp)：
    

    循环数	温度	时间
    1	94℃	5min
    30	94℃	5s
    	68℃	1kb/30s
    1	72℃	5min
    1	4℃	保温

50μL扩增体系中，λDNA为模板，扩增1kb～20kb片段。

泳道M：λ/Hind III DNAMarker；
泳道1：1kb；泳道2：2kb；
泳道3：4kb；泳道4：6kb；
泳道5：8kb；泳道6：10kb；
泳道7：12kb；泳道8：20kb。
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